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<第十期课程回顾>CRISPR/Cas9基因编辑系统在肿瘤免疫治疗中的应用

2019-11-21 334课程免疫治疗

课程回放:

https://vzan.com/live/tvchat-767031067?v=0.27388740322870286

CNGBdb组学/数据库系列课程开讲啦!
2019年11月19日<第十讲>上线
课程名称:CRISPR/Cas9基因编辑系统在肿瘤免疫治疗中的应用

讲师:高千千,华大生命科学研究院超级细胞所生物技术副研究员,博士毕业于北京大学,盐田“梧桐凤凰”人才,华大基因学院硕士生导师。2019年获得BGI Women Speaker Award,参与ICG-14第五届Women in Science Conference并作报告,获得三项专利及一项软著。

课程概要

  1. 什么是CRISPR / Cas9?
  2. 什么是CAR-T和TCR-T细胞疗法?
  3. CRISPR/Cas9在CAR-T和TCR-T细胞治疗中的应用
  4. CRISPR/Cas9在其他人类疾病中的应用

现场Q&A

  1. Q:CAR-T一般和哪些疗法结合?化疗放疗? A:很多患者在接受免疫治疗之前已接受了很多传统治疗,包括放疗、化疗以及一些免疫抑制剂等,如果都无效,则会考虑采取CAR-T治疗,而CAR-T治疗过程中也会和免疫检查点抑制剂等疗法进行结合,例如PD-1抗体等。

  2. Q:通用CAR-T通常敲除哪几个靶点?
    A:通用型CAR根据其原理需要敲除T细胞本身的内源TCR基因和HLA基因。

  3. Q:CAR-T对实体瘤的应用现状如何?
    A:目前上市的药物只有针对血液瘤的anti-CD19 CAR-T,目前CAR-T的临床实验也有针对实体瘤的,但是效果并不十分理想。首先是靶点问题,很难找到针对实体瘤的理想靶点,一般找的靶点是在正常组织中低表达,在实体瘤中高表达的基因,但是这样的靶点会有一些副作用。另外,实体瘤由于免疫抑制性环境抑制非常厉害,所以CAR基本上只能存在于实体瘤表面,无法进入实体瘤内部对其进行杀伤。目前主要是这两个原因限制了CAR-T在实体瘤中的应用,当然还有其他一些免疫细胞自身等的原因。

  4. Q:目前免疫治疗对部分患者效果不明显,原因可能是?
    A:这个问题有点大。对于免疫治疗来说,存在特异性,每个个体都不同,每个个体肿瘤类型也不同,面临的治疗也会非常不同,这是一个非常复杂的问题,因为体内环境十分复杂,例如大家都有T细胞,但是T细胞的状态及数量都不同,所以影响治疗反应的原因有很多:1)免疫细胞的状态;2)使用的治疗手段,例如抗原的表达量如何;3)能够进入肿瘤的浸润能力,这些都是影响治疗的原因,需要具体问题具体分析。目前我这个回答只是从大的方面做了一下说明。

  5. Q:TMB目前在哪些肿瘤中可靠性高一些?
    A:应用比较成功的应该是黑色素瘤,因为黑色素瘤的TMB是比较高的,使用PD-1的治疗效果相对较好,但是对于一些TMB较低的肿瘤,目前来说效果是不好的。黑色素瘤是一个比较典型的例子。

  6. Q:免疫治疗与载药给药系统关联大吗?
    A:载药给药系统:1)如果指的是把CRISPR导入T细胞方面,是有影响的,因为它直接影响编辑效率,从而影响拿到目的细胞的效率和数量;2)而如果指的是T细胞回输入人体方面,这个没有影响,例如血液瘤,回输直接使用静脉输注,是不会受影响的。

  7. Q:CRISPR脱靶问题有大改善吗?
    A:CRISPR脱靶就这个单一问题来说,目前有很大改善。有如下改善方式:1)CRISPR家族有很多类型,某些成员在保真性方面是非常好的,可以按需选择。2)对常用的CRISPR酶进行改造,通过突变提高其保真性。3)其他方式,例如改进gRNA长度等,都是有很多手段去改进的。

  8. Q:最后部分的ppt介绍B血液疾病的基因治疗用的是慢病毒包装,为什么不采取腺相关病毒呢?
    A:一方面慢病毒包装容量大,且可以长期表达,因为慢病毒是插入基因组内,而CAR是需要长期持续表达的,需要其在体内发挥抗肿瘤的效果。第二个原因,慢病毒在临床上是应用很多的,应用时间也很早,积累了大量实验以及临床数据,这些数据证明慢病毒虽然本质是随机插入,但从目前的临床效果看没有太大的问题,这也是传统疗法使用慢病毒表达的原因,但现在也有很多非病毒的替代系统来做CAR或基因编辑。

  9. Q:Cas9 RNP复合物电转方式是否安全?细胞存活率是否过关?临床是否接受cas9 rnp电转这种方式?
    A:安全性是没有问题的,Cas9 RNP本身就属于瞬时转染,把复合物转入细胞,相关蛋白和RNA就发生降解,所以它的off-target会远远低于其他方式。细胞存活方面会有一些影响,RNP是使用电击的技术使复合物进入T细胞,所以很多T细胞会因为电击死亡,这也是需要考虑的因素,因为后续治疗需要考虑细胞量。电转方式本身来说是没有问题的,但是需要考虑如何保证细胞量,细胞量问题解决了,RNP这个方式也没有问题。

  10. Q:CAR-T在肺癌治疗中用的多吗?
    A:肺癌的CAR-T治疗有人在做一些临床实验,但是由于靶点及进入肺癌细胞十分困难等问题,所以效果没有很好。肺癌有很多是由于KRAS或EGFR突变引起的,对于这些突变目前已经有一些好的抑制剂,很多患者可以使用相关抑制剂做治疗。其中KRAS也是一个主要的驱动突变,今年有两家公司(安进和Mirati)做了针对KRAS G12C突变的两款抑制剂,初步临床效果比较好。所以目前对于肺癌患者,临床上首先会进行靶向治疗,结合PD-1/PD-L1抑制剂等。一线、二线治疗如果没有效,可以考虑入组细胞免疫治疗的临床实验。

  11. Q:如何评价融瘤病毒联用?是免疫治疗嘛?
    A:融瘤病毒是免疫治疗,但是抱歉,由于我本身对融瘤病毒没有深入了解,所以无法对联用做评价。

  12. Q:肿瘤新生抗原疗法和CAR-T相比哪个更好?
    A:对于不同免疫疗法的比较不能单纯评价好或者不好,这个需要依具体情况而定。肿瘤新生抗原疗法和CAR-T疗法针对的类型不同。CAR-T主要针对血液瘤,所以如果是血液瘤病人优先选择CAR-T,但是对于实体瘤病人来说,TCR-T或肿瘤新生抗原疗法效果可能会好一些。但是还需要考虑另一个因素,就是肿瘤新生抗原疗法或TCR-T疗法用时会比较久(筛选、验证、回输)。

  13. Q:慢病毒介导的Cas9基因编辑,Cas9和sgRNA整合到基因组以后,会一直表达,那么off-target会更高吗?
    A:从本期课程也能看出,CAR基本是用慢病毒来做,但是Cas9基本没有用慢病毒,都是用电转的方式来做,目前常用的都是电转mRA或RNP的方式,就是因为考虑到慢病毒插入基因组会造成很多off-target才没有选择慢病毒介导。

审核:高千千 图片来源:微课页面截图。

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